Mae Javascript wedi'i analluogi yn eich porwr ar hyn o bryd.Pan fydd javascript wedi'i analluogi, ni fydd rhai o swyddogaethau'r wefan hon yn gweithio.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Adran Wyddoniaeth, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Sbaen * Mae gan yr awduron hyn rywfaint o fewnwelediad i'r gwaith hwn Equal cefndir cyfraniad: Mae asid hyaluronig (HA) yn polysacarid sy'n digwydd yn naturiol a ddefnyddir i gynhyrchu llenwyr dermol at ddibenion esthetig.Gan fod ganddo hanner oes o sawl diwrnod mewn meinweoedd dynol, mae llenwyr dermol sy'n seiliedig ar HA yn cael eu haddasu'n gemegol i ymestyn eu bywyd yn y corff.Yr addasiad mwyaf cyffredin mewn llenwyr masnachol sy'n seiliedig ar HA yw defnyddio ether diglycidyl 1,4-butanediol (BDDE) fel asiant croesgysylltu i groesgysylltu'r cadwyni HA.Ystyrir bod BDDE gweddilliol neu heb adweithio yn wenwynig ar <2 ran y filiwn (ppm);felly, rhaid meintioli'r BDDE gweddilliol yn y llenwad dermol terfynol i sicrhau diogelwch cleifion.Defnyddiau a dulliau: Mae'r astudiaeth hon yn disgrifio canfod a nodweddu sgil-gynnyrch yr adwaith trawsgysylltu rhwng BDDE ac HA o dan amodau alcalïaidd trwy gyfuno cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs (LC-MS).Canlyniadau: Ar ôl dadansoddiadau gwahanol, canfuwyd bod yr amodau alcalïaidd a thymheredd uchel a ddefnyddiwyd i ddiheintio hydrogel HA-BDDE yn hyrwyddo ffurfio'r sgil-gynnyrch newydd hwn, y cyfansoddyn “tebyg i glycol propylen”.Cadarnhaodd dadansoddiad LC-MS fod gan y sgil-gynnyrch yr un màs monoisotopic â BDDE, amser cadw gwahanol (tR), a modd amsugno UV gwahanol (λ = 200 nm).Yn wahanol i BDDE, sylwyd mewn dadansoddiad LC-MS, o dan yr un amodau mesur, fod gan y sgil-gynnyrch hwn gyfradd ganfod uwch ar 200 nm.Casgliad: Mae'r canlyniadau hyn yn dangos nad oes unrhyw epocsid yn strwythur y cyfansoddyn newydd hwn.Mae'r drafodaeth yn agored i asesu risg y sgil-gynnyrch newydd hwn a geir wrth gynhyrchu hydrogel HA-BDDE (llenwi dermal HA) at ddibenion masnachol.Geiriau allweddol: asid hyaluronig, llenwad dermol HA, asid hyaluronig traws-gysylltiedig, BDDE, dadansoddiad LC-MS, sgil-gynnyrch BDDE.
Llenwyr sy'n seiliedig ar asid hyaluronig (HA) yw'r llenwyr dermol mwyaf cyffredin a phoblogaidd a ddefnyddir at ddibenion cosmetig.1 Mae'r llenwad dermol hwn yn hydrogel, fel arfer yn cynnwys > 95% dŵr a 0.5-3% HA, sy'n rhoi strwythur tebyg i gel iddynt.Mae 2 HA yn polysacarid a phrif gydran y matrics allgellog o fertebratau.Un o'r cynhwysion.Mae'n cynnwys (1,4)-asid glucuronic-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) yn ailadrodd unedau deusacarid sydd wedi'u cysylltu gan fondiau glycosidig.Mae'r patrwm deusacarid hwn yr un peth ym mhob organeb.O'i gymharu â rhai llenwyr sy'n seiliedig ar brotein (fel colagen), mae'r eiddo hwn yn gwneud HA yn foleciwl biocompatible iawn.Gall y llenwyr hyn arddangos penodoldeb dilyniant asid amino a all gael ei gydnabod gan system imiwnedd y claf.
Pan gaiff ei ddefnyddio fel llenwad dermol, prif gyfyngiad HA yw ei drosiant cyflym o fewn y meinweoedd oherwydd presenoldeb teulu penodol o ensymau o'r enw hyaluronidase.Hyd yn hyn, disgrifiwyd nifer o addasiadau cemegol yn y strwythur HA i gynyddu hanner oes HA mewn meinweoedd.3 Mae'r rhan fwyaf o'r addasiadau hyn yn ceisio lleihau mynediad hyaluronidase i bolymerau polysacarid trwy groesgysylltu cadwyni HA.Felly, oherwydd ffurfio pontydd a'r bondiau cofalent rhyngfoleciwlaidd rhwng y strwythur HA a'r asiant trawsgysylltu, mae hydrogel HA traws-gysylltiedig yn cynhyrchu mwy o gynhyrchion diraddio gwrth-ensymau na'r HA naturiol.4-6
Hyd yn hyn, mae'r cyfryngau croesgysylltu cemegol a ddefnyddir i gynhyrchu HA crosslinked yn cynnwys methacrylamid, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, ether diglycidyl 1,4-butanediol (BDDE) Ac poly(ethylen glycol) diglycidyl ether.10 ,11 BDDE yw'r asiant croesgysylltu a ddefnyddir amlaf.Er bod y mathau hyn o hydrogeliau wedi'u profi i fod yn ddiogel ers degawdau, mae'r cyfryngau croesgysylltu a ddefnyddir yn adweithyddion adweithiol a all fod yn sytotocsig ac, mewn rhai achosion, yn mwtagenig.12 Felly, rhaid i'w cynnwys gweddilliol yn yr hydrogel terfynol fod yn uchel.Ystyrir bod BDDE yn ddiogel pan fo'r crynodiad gweddilliol yn llai na 2 ran y filiwn (ppm).4
Mae yna nifer o ddulliau i ganfod crynodiad BDDE gweddillion isel, gradd trawsgysylltu a safle amnewid mewn hydrogeliau HA, megis cromatograffaeth nwy, cromatograffaeth eithrio maint ynghyd â sbectrometreg màs (MS), dulliau mesur fflworoleuedd cyseiniant magnetig niwclear (NMR), a Arae deuod yn gysylltiedig â chromatograffeg hylif perfformiad uchel (HPLC).13-17 Mae'r astudiaeth hon yn disgrifio canfod a nodweddu sgil-gynnyrch yn yr hydrogel HA traws-gysylltiedig terfynol a gynhyrchir gan adwaith BDDE a HA o dan amodau alcalïaidd.HPLC a sbectrometreg màs cromatograffaeth hylif (dadansoddiad LC-MS).Gan nad yw gwenwyndra'r sgil-gynnyrch hwn o BDDE yn hysbys, rydym yn argymell y dylid pennu ei feintoli gweddillion mewn modd tebyg i'r dull a gyflawnir fel arfer ar BDDE yn y cynnyrch terfynol.
Mae gan yr halen sodiwm a gafwyd o HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) bwysau moleciwlaidd o ~1,368,000 Da (dull Laurent) 18 a gludedd cynhenid o 2.20 m3/kg.Ar gyfer yr adwaith trawsgysylltu, prynwyd BDDE (≥95%) gan Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, UDA).Prynwyd halwynog byffer ffosffad gyda pH 7.4 oddi wrth Sigma-Aldrich Company.Prynwyd yr holl doddyddion, asetonitrile a dŵr a ddefnyddiwyd yn y dadansoddiad LC-MS o ansawdd gradd HPLC.Mae asid fformig (98%) yn cael ei brynu fel gradd adweithydd.
Perfformiwyd yr holl arbrofion ar system Acquity UPLC (Waters, Milford, MA, UDA) a'u cysylltu â sbectromedr màs pedwarpol triphlyg API 3000 gyda ffynhonnell ïoneiddiad electrochwistrellu (AB SCIEX, Framingham, MA, UDA).
Dechreuwyd y synthesis o hydrogeliau HA traws-gysylltiedig trwy ychwanegu 198 mg o BDDE at hydoddiant hyaluronate sodiwm 10% (w / w) ym mhresenoldeb alcali 1% (sodiwm hydrocsid, NaOH).Y crynodiad BDDE terfynol yn y cymysgedd adwaith oedd 9.9 mg/mL (0.049 mM).Yna, cymysgwyd cymysgedd yr adwaith yn drylwyr a'i homogeneiddio a'i ganiatáu i fynd ymlaen ar 45 ° C am 4 awr.19 Mae pH yr adwaith yn cael ei gynnal ar ~12.
Wedi hynny, golchwyd cymysgedd yr adwaith â dŵr, a chafodd yr hydrogel HA-BDDE terfynol ei hidlo a'i wanhau â byffer PBS i gyflawni crynodiad HA o 10 i 25 mg / mL, a pH terfynol o 7.4.Er mwyn sterileiddio'r hydrogeliau HA traws-gysylltiedig a gynhyrchir, mae'r holl hydrogeliau hyn yn cael eu hawtoclafio (120 ° C am 20 munud).Mae'r hydrogel BDDE-HA wedi'i buro yn cael ei storio ar 4 ° C hyd nes y caiff ei ddadansoddi.
Er mwyn dadansoddi'r BDDE sy'n bresennol yn y cynnyrch HA traws-gysylltiedig, cafodd sampl 240 mg ei bwyso a'i gyflwyno i'r twll canol (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, UDA; cyfaint 0.5 mL) a'i allgyrchu ar 10,000 rpm ar dymheredd yr ystafell 10 munud.Casglwyd a dadansoddwyd cyfanswm o 20 µL o hylif tynnu i lawr.
Er mwyn dadansoddi safon BDDE (Sigma-Aldrich Co) o dan amodau alcalïaidd (1%, 0.1% a 0.01% NaOH), os bodlonir yr amodau canlynol, y sampl hylif yw 1:10, 1:100, neu hyd at 1:1,000,000 Os oes angen, defnyddiwch ddŵr wedi'i ddadïoneiddio MilliQ i'w ddadansoddi.
Ar gyfer y deunyddiau cychwyn a ddefnyddir yn yr adwaith trawsgysylltu (HA 2%, H2O, 1% NaOH, a 0.049 mM BDDE), dadansoddwyd 1 ml o bob sampl a baratowyd o'r deunyddiau hyn gan ddefnyddio'r un amodau dadansoddi.
Er mwyn pennu penodoldeb y copaon sy'n ymddangos yn y map ïon, ychwanegwyd 10 µL o 100 ppb datrysiad safonol BDDE (Sigma-Aldrich Co) at y sampl 20 µL.Yn yr achos hwn, crynodiad terfynol y safon ym mhob sampl yw 37 ppb.
Yn gyntaf, paratowch doddiant stoc BDDE gyda chrynodiad o 11,000 mg/L (11,000 ppm) trwy wanhau 10 μL o BDDE safonol (Sigma-Aldrich Co) â 990 μL MilliQ dŵr (dwysedd 1.1 g/mL).Defnyddiwch y datrysiad hwn i baratoi hydoddiant BDDE 110 µg/L (110 ppb) fel gwanediad safonol canolraddol.Yna, defnyddiwch y gwanwr safonol BDDE canolraddol (110 ppb) i baratoi'r gromlin safonol trwy wanhau'r gwanwr canolradd sawl gwaith i gyflawni'r crynodiad dymunol o 75, 50, 25, 10, ac 1 ppb.Fel y dangosir yn Ffigur 1, canfyddir bod gan gromlin safonol BDDE o 1.1 i 110 ppb llinoledd da (R2> 0.99).Ailadroddwyd y gromlin safonol mewn pedwar arbrawf annibynnol.
Ffigur 1 Cromlin graddnodi safonol BDDE a gafwyd trwy ddadansoddiad LC-MS, lle gwelir cydberthynas dda (R2> 0.99).
Byrfoddau: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs.
Er mwyn nodi a mesur y safonau BDDE sy'n bresennol yn yr HA traws-gysylltiedig a'r safonau BDDE yn yr ateb sylfaenol, defnyddiwyd dadansoddiad LC-MS.
Cyflawnwyd y gwahaniad cromatograffig ar golofn LUNA 2.5 µm C18(2)-HST (50 × 2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, UDA) a'i gadw ar dymheredd ystafell (25 ° C) yn ystod y dadansoddiad.Mae'r cyfnod symudol yn cynnwys acetonitrile (toddydd A) a dŵr (toddydd B) sy'n cynnwys 0.1% asid fformig.Mae'r cyfnod symudol yn cael ei osgoi gan elution graddiant.Mae'r graddiant fel a ganlyn: 0 munud, 2% A;1 munud, 2% A;6 munud, 98% A;7 munud, 98% A;7.1 munud, 2% A;10 munud , 2% A. Yr amser rhedeg yw 10 munud a chyfaint y pigiad yw 20 µL.Mae amser cadw BDDE tua 3.48 munud (yn amrywio o 3.43 i 4.14 munud yn seiliedig ar arbrofion).Cafodd y cyfnod symudol ei bwmpio ar gyfradd llif o 0.25 mL/munud ar gyfer dadansoddiad LC-MS.
Ar gyfer dadansoddi a meintioli BDDE gan MS, mae'r system UPLC (Waters) wedi'i chyfuno â sbectromedr màs pedwarpol triphlyg API 3000 (AB SCIEX) sydd â ffynhonnell ïoneiddio electrochwistrellu, a pherfformir y dadansoddiad yn y modd ïon positif (ESI +).
Yn ôl y dadansoddiad darn ïon a gyflawnwyd ar BDDE, penderfynwyd mai'r darn â'r dwyster uchaf oedd y darn sy'n cyfateb i 129.1 Da (Ffigur 6).Felly, yn y modd monitro aml-ïon (MIM) ar gyfer meintioli, trosiad màs (cymhareb màs-i-wefr [m/z]) BDDE yw 203.3/129.1 Da.Mae hefyd yn defnyddio modd sgan llawn (FS) a modd sgan ïon cynnyrch (PIS) ar gyfer dadansoddiad LC-MS.
Er mwyn gwirio penodoldeb y dull, dadansoddwyd sampl wag (cyfnod symudol cychwynnol).Ni chanfuwyd unrhyw signal yn y sampl wag gyda thrawsnewidiad màs o 203.3/129.1 Da.O ran ailadroddadwyedd yr arbrawf, dadansoddwyd 10 pigiad safonol o 55 ppb (yng nghanol y gromlin graddnodi), gan arwain at wyriad safonol gweddilliol (RSD) <5% (data heb ei ddangos).
Cafodd y cynnwys BDDE gweddilliol ei feintioli mewn wyth hydrogel HA traws-gysylltiedig BDDE awtoclaf gwahanol, sy'n cyfateb i bedwar arbrawf annibynnol.Fel y disgrifir yn yr adran “Deunyddiau a Dulliau”, mae'r meintioliad yn cael ei werthuso yn ôl gwerth cyfartalog cromlin atchweliad gwanhad safonol BDDE, sy'n cyfateb i'r brig unigryw a ganfuwyd yn ystod trawsnewid màs BDDE o 203.3/129.1 Da, gyda chadwyn amser o 3.43 i 4.14 munud Ddim yn aros.Mae Ffigur 2 yn dangos cromatogram enghreifftiol o safon gyfeirio BDDE 10 ppb.Mae Tabl 1 yn crynhoi cynnwys BDDE gweddilliol wyth hydrogel gwahanol.Yr ystod gwerth yw 1 i 2.46 ppb.Felly, mae'r crynodiad BDDE gweddilliol yn y sampl yn dderbyniol ar gyfer defnydd dynol (<2 ppm).
Ffigur 2 Cromatogram ïon o safon gyfeirio BDDE 10 ppb (Sigma-Aldrich Co), trawsnewidiad MS (m/z) a gafwyd trwy ddadansoddiad LC-MS o 203.30/129.10 Da (yn y modd MRM positif).
Byrfoddau: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs;MRM, monitro adwaith lluosog;MS, màs;m/z, cymhareb màs-i-wefr.
Sylwer: Mae samplau 1-8 yn hydrogeliau HA traws-gysylltiedig BDDE wedi'u hawtoclafio.Mae swm gweddilliol BDDE yn yr hydrogel a brig amser cadw BDDE hefyd yn cael eu hadrodd.Yn olaf, adroddir hefyd am fodolaeth uchafbwyntiau newydd gydag amseroedd cadw gwahanol.
Byrfoddau: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;HA, asid hyaluronig;MRM, monitro adwaith lluosog;tR, amser cadw;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs;RRT, amser cadw cymharol.
Yn syndod, dangosodd y dadansoddiad o'r cromatogram ïon LC-MS, yn seiliedig ar yr holl samplau hydrogel HA traws-gysylltiedig awtoclaf a ddadansoddwyd, fod uchafbwynt ychwanegol ar yr amser cadw byrrach o 2.73 i 3.29 munud.Er enghraifft, mae Ffigur 3 yn dangos cromatogram ïon sampl HA traws-gysylltiedig, lle mae brig ychwanegol yn ymddangos ar amser cadw gwahanol o tua 2.71 munud.Canfuwyd mai 0.79 (Tabl 1) oedd yr amser cadw cymharol a arsylwyd (RRT) rhwng yr uchafbwynt newydd a'r uchafbwynt o BDDE (Tabl 1).Gan ein bod yn gwybod bod y brig newydd a welwyd yn cael ei gadw'n llai yn y golofn C18 a ddefnyddir yn y dadansoddiad LC-MS, efallai y bydd y brig newydd yn cyfateb i gyfansoddyn mwy pegynol na BDDE.
Ffigur 3 Cromatogram Ion o sampl hydrogel HA croes-gysylltiedig a gafwyd gan LC-MS (trosiad màs MRM 203.3/129.0 Da).
Byrfoddau: HA, asid hyaluronig;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs;MRM, monitro adwaith lluosog;RRT, amser cadw cymharol;tR, amser cadw.
Er mwyn diystyru'r posibilrwydd y gallai'r brigau newydd a welwyd fod yn halogion a oedd yn bresennol yn wreiddiol yn y deunyddiau crai a ddefnyddiwyd, dadansoddwyd y deunyddiau crai hyn hefyd gan ddefnyddio'r un dull dadansoddi LC-MS.Mae'r deunyddiau cychwyn a ddadansoddwyd yn cynnwys dŵr, 2% NaHA mewn dŵr, 1% NaOH mewn dŵr, a BDDE ar yr un crynodiad a ddefnyddir yn yr adwaith trawsgysylltu.Nid oedd cromatogram ïon y deunydd cychwyn a ddefnyddiwyd yn dangos unrhyw gyfansawdd neu frig, ac mae ei amser cadw yn cyfateb i'r brig newydd a arsylwyd.Mae'r ffaith hon yn dileu'r syniad y gall y deunydd cychwynnol gynnwys nid yn unig unrhyw gyfansoddion neu sylweddau a allai ymyrryd â'r weithdrefn ddadansoddi, ond nid oes unrhyw arwydd o groeshalogi posibl â chynhyrchion labordy eraill.Dangosir y gwerthoedd crynodiad a gafwyd ar ôl dadansoddiad LC-MS o BDDE a chopaon newydd yn Nhabl 2 (samplau 1-4) a'r cromatogram ïon yn Ffigur 4.
Sylwer: Mae samplau 1-4 yn cyfateb i'r deunyddiau crai a ddefnyddir i gynhyrchu hydrogeliau HA traws-gysylltiedig BDDE wedi'u hawtoclafio.Ni chafodd y samplau hyn eu hawtoclafio.
Byrfoddau: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;HA, asid hyaluronig;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs;MRM, monitro adwaith lluosog.
Mae Ffigur 4 yn cyfateb i gromatogram LC-MS sampl o'r deunydd crai a ddefnyddir yn adwaith trawsgysylltu HA a BDDE.
Nodyn: Mae’r rhain i gyd yn cael eu mesur ar yr un crynodiad a’r un gymhareb a ddefnyddir i gynnal yr adwaith trawsgysylltu.Mae'r niferoedd ar gyfer y deunyddiau crai a ddadansoddwyd gan y cromatogram yn cyfateb i: (1) dŵr, (2) hydoddiant dyfrllyd 2% HA, (3) 1% hydoddiant dyfrllyd NaOH.Perfformir dadansoddiad LC-MS ar gyfer trosi màs o 203.30/129.10 Da (yn y modd MRM positif).
Byrfoddau: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;HA, asid hyaluronig;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs;MRM, monitro adwaith lluosog.
Astudiwyd yr amodau a arweiniodd at ffurfio copaon newydd.Er mwyn astudio sut mae'r amodau adwaith a ddefnyddir i gynhyrchu'r hydrogel HA traws-gysylltiedig yn effeithio ar adweithedd asiant croesgysylltu BDDE, gan arwain at ffurfio brigau newydd (sgil-gynhyrchion posibl), perfformiwyd gwahanol fesuriadau.Yn y penderfyniadau hyn, buom yn astudio a dadansoddi'r croesgysylltydd BDDE terfynol, a gafodd ei drin â chrynodiadau gwahanol o NaOH (0%, 1%, 0.1%, a 0.01%) mewn cyfrwng dyfrllyd, wedi'i ddilyn gan awtoclafio neu hebddo.Mae'r weithdrefn bacteria i efelychu'r un amodau yr un fath â'r dull a ddefnyddir i gynhyrchu'r hydrogel HA traws-gysylltiedig.Fel y disgrifir yn yr adran “Deunyddiau a Dulliau”, dadansoddwyd trawsnewidiad màs y sampl gan LC-MS i 203.30/129.10 Da.Cyfrifir y BDDE a chrynodiad y brig newydd, a dangosir y canlyniadau yn Nhabl 3. Ni chanfuwyd unrhyw gopaon newydd yn y samplau na chawsant eu hawtoclafio, waeth beth fo presenoldeb NaOH yn yr hydoddiant (samplau 1-4, Tabl 3).Ar gyfer samplau awtoclafio, dim ond ym mhresenoldeb NaOH yn yr hydoddiant y canfyddir copaon newydd, ac mae'n ymddangos bod ffurfio'r brig yn dibynnu ar y crynodiad NaOH yn yr hydoddiant (samplau 5-8, Tabl 3) (RRT = 0.79).Mae Ffigur 5 yn dangos enghraifft o gromatogram ïon, yn dangos dau sampl awtoclaf ym mhresenoldeb neu absenoldeb NAOH.
Byrfoddau: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs;MRM, monitro adwaith lluosog.
Nodyn: Y cromatogram uchaf: Cafodd y sampl ei drin â hydoddiant dyfrllyd 0.1% NaOH a'i awtoclafio (120 ° C am 20 munud).Cromatogram gwaelod: Ni chafodd y sampl ei drin â NaOH, ond cafodd ei awtoclafio o dan yr un amodau.Dadansoddwyd trosiad màs 203.30/129.10 Da (yn y modd MRM positif) gan LC-MS.
Byrfoddau: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs;MRM, monitro adwaith lluosog.
Ym mhob sampl awtoclaf, gyda NaOH neu hebddo, gostyngwyd y crynodiad BDDE yn fawr (hyd at 16.6 gwaith) (samplau 5-8, Tabl 2).Gall y gostyngiad mewn crynodiad BDDE fod oherwydd y ffaith y gall dŵr, ar dymheredd uchel, weithredu fel sylfaen (niwcleoffil) i agor cylch epocsid BDDE i ffurfio cyfansawdd 1,2-diol.Mae ansawdd monoisotopic y cyfansoddyn hwn yn wahanol i ansawdd BDDE ac felly ni fydd yn cael ei effeithio.Canfu LC-MS symudiad màs o 203.30/129.10 Da.
Yn olaf, mae'r arbrofion hyn yn dangos bod cynhyrchu copaon newydd yn dibynnu ar bresenoldeb BDDE, NAOH, a'r broses awtoclafio, ond nid oes ganddo unrhyw beth i'w wneud â HA.
Roedd yr uchafbwynt newydd a ddarganfuwyd ar amser cadw o tua 2.71 munud wedyn yn cael ei nodweddu gan LC-MS.At y diben hwn, cafodd BDDE (9.9 mg/mL) ei ddeor mewn hydoddiant dyfrllyd 1% NaOH a'i awtoclafio.Yn Nhabl 4, mae nodweddion y brig newydd yn cael eu cymharu â'r brig cyfeirio BDDE hysbys (amser cadw tua 3.47 munud).Yn seiliedig ar ddadansoddiad darnio ïon y ddau gopa, gellir dod i'r casgliad bod yr uchafbwynt gydag amser cadw o 2.72 munud yn dangos yr un darnau â brig BDDE, ond gyda dwyster gwahanol (Ffigur 6).Ar gyfer yr uchafbwynt sy'n cyfateb i'r amser cadw (PIS) o 2.72 munud, gwelwyd uchafbwynt dwysach ar ôl darnio ar fàs o 147 Da.Yn y crynodiad BDDE (9.9 mg / mL) a ddefnyddir yn y penderfyniad hwn, gwelwyd gwahanol foddau amsugno (UV, λ = 200 nm) yn y sbectrwm uwchfioled hefyd ar ôl gwahanu cromatograffig (Ffigur 7).Mae'r brig gydag amser cadw o 2.71 munud yn dal i fod yn weladwy ar 200 nm, tra na ellir arsylwi uchafbwynt BDDE yn y cromatogram o dan yr un amodau.
Tabl 4 Canlyniadau nodweddu'r brig newydd gydag amser cadw o tua 2.71 munud a brig BDDE gydag amser cadw o 3.47 munud
Nodyn: Er mwyn cael y canlyniadau hyn, cynhaliwyd dadansoddiadau LC-MS a HPLC (MRM a PIS) ar y ddau uchafbwynt.Ar gyfer dadansoddiad HPLC, defnyddir canfod UV gyda thonfedd o 200 nm.
Byrfoddau: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;HPLC, cromatograffaeth hylif perfformiad uchel;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs;MRM, monitro adwaith lluosog;m/z, cymhareb màs-i-wefr;PIS, cynnyrch Ion sganio;golau uwchfioled, golau uwchfioled.
Sylwer: Ceir y darnau màs trwy ddadansoddiad LC-MS (PIS).Cromatogram uchaf: sbectrwm màs o ddarnau sampl safonol BDDE.Cromatogram gwaelod: Sbectrwm màs y brig newydd a ganfuwyd (RRT sy'n gysylltiedig â brig BDDE yw 0.79).Cafodd BDDE ei brosesu mewn hydoddiant 1% NaOH a'i awtoclafio.
Byrfoddau: BDDE, ether diglycidyl 1,4-butanediol;LC-MS, cromatograffaeth hylif a sbectrometreg màs;MRM, monitro adwaith lluosog;PIS, sgan ïon cynnyrch;RRT, amser cadw cymharol.
Ffigur 7 Cromatogram Ion o'r ïon rhagflaenydd 203.30 Da, a (A) yr uchafbwynt newydd gydag amser cadw o 2.71 munud a (B) canfod UV uchafbwynt safonol cyfeirnod BDDE ar 3.46 munud ar 200 nm.
Yn yr holl hydrogeliau HA traws-gysylltiedig a gynhyrchwyd, sylwyd bod y crynodiad BDDE gweddilliol ar ôl meintioli LC-MS yn <2 ppm, ond ymddangosodd uchafbwynt anhysbys newydd yn y dadansoddiad.Nid yw'r brig newydd hwn yn cyfateb i gynnyrch safonol BDDE.Mae'r cynnyrch safonol BDDE hefyd wedi cael yr un trosiad ansawdd (trosi MRM 203.30/129.10 Da) yn y modd MRM cadarnhaol.Yn gyffredinol, defnyddir dulliau dadansoddol eraill megis cromatograffaeth fel profion terfyn i ganfod BDDE mewn hydrogeliau, ond mae'r terfyn canfod uchaf (LOD) ychydig yn is na 2 ppm.Ar y llaw arall, hyd yn hyn, mae NMR ac MS wedi'u defnyddio i nodweddu graddau'r croesgysylltu a/neu addasu HA yn y darnau uned siwgr o gynhyrchion HA traws-gysylltiedig.Ni fu pwrpas y technegau hyn erioed i feintioli canfod BDDE gweddilliol ar grynodiadau mor isel ag y disgrifiwn yn yr erthygl hon (LOD ein dull LC-MS = 10 ppb).
Amser post: Medi-01-2021